«Двенадцатая ночь» исследует несколько тем, включая любовь, маскировку и обман. Персонажи пьесы используют различные маскировки и обманы, чтобы добиться своих целей. Например, Виола маскируется под человека по имени Чезарио, чтобы служить герцогу Орсино. В пьесе также присутствуют ошибочные личности, например, когда Мальволио принимает письмо Оливии за любовную записку к нему. «Двенадцатая ночь» также представляет собой сложное исследование любви и ее многочисленных форм:от безответной любви до романтической любви и любви к себе.