Он вернулся в 1535 году с тремя кораблями и провел зиму 1535–1536 годов в Стадаконе (недалеко от современного Квебека), где познакомился с ирокезами Святого Лаврентия под предводительством Доннаконы. Картье похитил Доннакону и одиннадцать его соплеменников и увез их во Францию, где несколько человек умерли от болезней. Остальные вернулись в 1536 году, но вскоре умерли.
В Хочелага (современный Монреаль) Картье встретил другое ирокезское племя и увидел пороги Лашин. Эти племена познакомили Картье с использованием каноэ, что сделало возможным дальнейшее проникновение вглубь страны исследователей и торговцев мехом.